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Western Blot实验技术服务
发布时间:2016/1/11 15:26:08 阅读次数:751

                                 Western Blot实验技术服务

 一、概述

     Western Blot是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE凝胶电泳分离开,再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体上,然后再加上抗体形成抗原抗体复合物,再利用发光或显色的原理将结果显示到膜或者底片上。

     SDS-PAGE电泳的高分辨率以及固相免疫测定的特异性和敏?#34892;员?#35777;了最终实验结果的准确性。WB是半定量实验,相比较于定性实验有数据分析,但是需要严格的参照标准,因此不是准确的数量关系,这也是与定量试验的不同之处。

二、技术流程

1.根据目标蛋白在细胞中的位置(细胞核中,细胞浆中,细胞膜上)和目标蛋白的性质(变性以及非变性)选择合?#23454;?#25552;取蛋白的方法

2.用合?#23454;?#26041;法例如Bradford或者BCA法测定蛋白含量

3.根据目标蛋白的大小制作合适浓度的SDS凝胶

4.根据目标蛋白的大小选择合?#23454;?#30005;泳电压以及电泳时间

5.根据目标蛋白的大小以及剪切的凝胶的大小选择合?#23454;?#36716;膜电流以?#30333;?#33180;时间

6.根据目标蛋白的性质选择合?#23454;?#23553;闭方法,例如脱脂奶粉,BSA等方法封闭

7.选择合适浓度的一抗进行孵育,洗膜

8.选择合适浓度的二抗进行孵育,洗膜

9.ECL发光液进行曝光

三、客户须知

1、 检测样本?#30418;孿实?#32452;织或者细胞

2、 样本量:检测细胞样本的一个指标的最低细胞含量是1*106,检测组织样本的一个指标的最低组织样品为30mg(建议多提供样本,便于?#24515;ィ?/span>

3、样本保存:

(1)新?#23454;?#32452;织样本:迅速冻存。

(2)悬浮细胞:收集完以后,冷的PBS洗3遍,吸净残余的液体,冷冻保存。

(3)贴壁细胞:吸净培养基以后,预热的PBS洗3遍,胰酶收集,再用冷的PBS洗3遍,吸净残余液体,冷冻保存?#27426;?#20110;不适合用胰酶收集的细胞(例如胰?#22797;?#29702;会消化掉一部分蛋白或者对于目标蛋白有刺激作用),预热的PBS洗3遍以后,用细胞刮收集细胞,吸净残余的液体,冷冻保存。

 4、请提前告诉我们?#32791;?#26679;本的?#36136;簦?#20154;、大鼠、小鼠、兔、猪等)、样本数量、待测指标。

5、样本邮寄:放入冰袋或者干冰及时寄送,建议选择顺丰快递陆运或者中通快递陆运。

四、报告内容及标准

1  目的蛋白曝光照片一张

2  电子版目的蛋白和内参的照片

3  灰度分析数据一份

4  蛋白含量数据

5  完整的实验报告(试验方法,试验参数,实验仪器参数)

五、收费标?#25216;?#26381;务周期

    收费标?#25216;?#26381;务周期因根据客户提供的样品不同而有所改变,详细请跟客服专员联系或参考所签署的合作合同。

六、质量保证

    良好的实验平台体系,先进的仪器设备以及?#37038;耊B实验多年的优质服务团队为您最终满意的实验结果保驾护航。

七、售后服务

    本公司会?#27426;?#26399;进行顾客回访,以提高我们的服务质量。本条款以所签订的合作合同为依据,详情会因合同内容的不同而有所差异。

 

 

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